Hauptcharaktere: Professor Layton - Luke - Flora - Don Paolo - Inspektor Chelmey - Dahlia Reinhold - Bruno
Franko - Schnurrbert - Ingrid - Percy - Kalle - Ramón - Matthew - Gordon - Simon - Hektor - Béatrice - Agnes - Plötz - Croûton - Schnipp - Rodney - Lucy - Zappone - Gérard - Beppo - Andrea - Polo - Bouillon - Prosciutto - Archibald - Sylvain - Martha - Giuseppe - Augustus Reinhold - Viola Reinhold - Oma Enygma - Mysteriöses Mädchen
Tiere: Roboterhund - Claudia